Мониторинг состояния поголовья является очень важным пунктом в программе борьбы с сальмонеллой. Если удалось изолировать птиц от пагубного воздействия сальмонеллы в отдельном птичнике, то следующим шагом дальновидного индейковода должен стать ввод программы усиленной биологической безопасности и санитарных мер для того, чтобы сохранить достигнутый результат для потомства или следующих стад, которые будет размещены в этом птичнике. Однако без регулярного отбора образцов и мониторинга наличия и концентрации сальмонеллы, вряд ли следует ожидать у поголовья низкого уровня заражения.
Существует много различных способов мониторинга состояния поголовья.
Отбор образцов методом «взятия мазков» лучше проводить на свежих слепокишечных экскрементах, поскольку сальмонелла предпочитает захватывать именно эту область внутренностей. Способ отбора мазков позволяет сделать взятие проб от конкретной птицы. Индивидуальные пробы обычно группируются по 5 или 10 в группе и помещаются в заранее обогащенную жидкость. Пробы мазками показывают, какие именно птицы распространяют сальмонеллу.
Взятие проб с окружающей среды является более надежной индикацией реального состояния поголовья в плане сальмонеллы. Это особенно важно внутри птичника с несушками, поскольку яйца тоже подвергаются воздействию окружающей среды. Хотя конкретная индейка может и не распространять сальмонеллу, окружение, которое влияет на яйцо, может оказаться положительным. Поэтому на практике гораздо важнее узнать, является ли все поголовье положительным на сальмонеллу, чем выявить заболеваемость отдельных птиц.
В США взятие проб мазками обычно используется для определения состояния всего поголовья. Влажная стерилизованная ткань (25?35 см) крепится к веревке и протаскивается по отходам через все помещение. Этот кусок ткани, с закрепившимися на нем отходами и экскрементами, считается образцом, который полностью инкубируется.
«Метод галоши», впервые описанный Ахо, на практике оказался очень действенным; это точная техника для взятия образцов из окружающей среды. Используются пластиковые галоши, в которых нужно пройти по птичнику. Затем они инкубируются со всем прикрепившимся органическим материалом. Количество органического материала зависит от таких факторов как влажность отходов и шершавость поверхности обуви. Количество образцов, которое необходимо взять, определяется согласно Ахо (1992). Пять пар галош определят сальмонеллу, если заражен только 1% поголовья. И всего одна пара галош определит сальмонеллу в птичнике, где заражено 5% поголовья. Достаточно точный уровень для практического мониторинга.
В одном из исследований, проведенном в 1996 году, Калдвелл и его коллеги сравнивали частоту изоляции сальмонеллы при «методе галоши» против традиционных методов взятия мазков. Их результаты показали, что сальмонелла определялась с одинаковой частотой обоими способами на девяти отдельных бройлерных фермах в течение трех отдельных периодов взятия проб. Оба метода одинаково точно определяли наличие сальмонеллы как при свободном помещении (в ожидании следующей посадке птицы), так и при занятом.
В компании «Хайбрид» (Hybrid) мы обычно используем галоши, которые применяются в операционных в больницах. Мы создаем собственные наборы для мониторинга окружающей среды, которые включают в себя следующее «оснащение»:
2 одноразовых резиновых сапога;
2 стерильных марлевых хирургических галоши или сапога (мы упаковываем обувь в стерильный мешок размером 4? x 8» (дюймов), показанный на рисунке);
1 стерильная закрывающаяся сумка с этикеткой для записи важной информации, в частности: идентификация стада, возраст птиц, дата исследования, номер птичника, имя специалиста, собравшего образец и т. д.
Наборы должны храниться в чистом, сухом месте. При взятии проб никогда не пользуйтесь набором, который был открыт, или сумкой, в которой находится стерильная обувь, если она была разорвана. Следует убедиться, что набор не заражен, прежде, чем он окажется условиях, где будут проводиться отборы проб. Рекомендуется хранить наборы в запечатанном контейнере, если вы собираетесь везти их в машине.
Процедура отбора проб с помощью обуви:
Промойте и продезинфицируйте обувь прежде, чем войти в птичник.
Очень важно либо дезинфицировать руки с помощью алкоголесодержащего геля, либо одеть стерильные перчатки.
Откройте набор и наденьте одноразовые галоши на вашу чистую продезинфицированную обувь.
Откройте сумки со стерильными галошами и оденьте галоши.
Походите по птичнику как минимум 15 минут.
Снимите стерильные галоши и поместите их в стерильную закрывающуюся сумку.
Герметично закройте сумку. Напишите необходимую идентифицирующую информацию: дату, наименование фермы, номер птичника или другие данные.
Охладите образец, отправляемый в лабораторию, или поместите его в небольшой холодильник со льдом.
Обработка в лаборатории:
Когда образцы появятся в лаборатории, добавьте 45 мл буферной пептонной воды к каждой герметичной сумке. Затем эти сумки следует поместить в инкубатор на 24 часа при температуре 37°C (98.6°F). После этого 1 мл сокращенной пробы помещается в 9 мл тетратионатовой питательной среды с бриллиантовой зеленью и инкубируется на 24 часа при температуре 43°C (109.4°F). С этого момента образцы высеваются на чашки на выборочную среду и/или сокращенную пробу, помещенную в питательную среду М для тестирования ELISA (иммуноферментный анализ).
Наш опыт
Мы используем эту технику в компании «Hybrid Turkeys» для сбора образцов из окружающей среды в течение последних 15 лет. Преимущества метода галоши:
Любое лицо можно быстро научить технике отбора проб такого типа. Не требуются лабораторные сотрудники для проведения отбора проб. По существу, для отбора проб не застрачивается дополнительное время.
Управляющий фермой или лицо, обслуживающее ферму, может носить галоши во время обычного обхода.
Этот метод в физическом плане проще метода отбора проб мазками. Сидящие на полу самки, агрессивные самцы и любопытные предприниматели могут часто ограничивать количество мазка, взятого с пола, к которому прикасаются инструментом для взятия мазков. В случае с методом галоши, куда бы вы ни шли — такой «инструмент» берет пробу с любого места, где вы проходите.
Собранные материалы можно легко отправить в лабораторию для выращивания в питательной среде, не задаваясь вопросами протекания, так как в них нет жидкого материала (ср. с методом мазка). К примеру, лаборатория компании Hybrid легко сняла сальмонеллу с образцов с галош, взятых 48 часами ранее.
Не требуется предварительного планирования. Так как наборы можно перевозить в контейнере обслуживающего автомобиля (хранить стерильными!) или хранить на ферме, пробы можно забирать в любое время. Мазки же, получаемые в замороженном состоянии, должны использоваться сразу, как только они начнут таять.
В заключение, метод галоши является удобным и надежным методом мониторинга окружающей среды на наличие или отсутствие сальмонеллы. Знание фактического состояния всего поголовья на ферме является решающим критическим моментом в программе борьбы с сальмонеллой, ее истребления или предотвращения.
Литература
Ахо, М. 1992. Проблемы отбора проб на сальмонеллу. Международныйжурналпищевоймикробиологии. 15:225-235.
Болдер Н. М. Мониторинг сальмонеллы у индеек. Индейки.Авг., 1993.Стр. 26,28
Калдвелл,Д.Дж.,Харгис,Д.Е.,Дж.Р.ДеЛоак.1998.Частота изоляции сальмонеллы от защитной обуви, носимой в бройлерных индюшатниках, в сравнении с отбором проб методом мазка. Заболевания птиц.42: 381–384